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新知應用小學堂

2021/04
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2021/04/06 最高靈敏miRNA 偵測套組-ID3EAL 讓你找到更多可能性

miRNA屬於非編碼RNA(non-coding RNA)一員,能夠調控轉錄後基因調控,對於細胞發育、細胞分化和訊息傳遞有著重要的地位,此外miRNA表達的失調可能也與部分疾病例如癌癥息息相關。因為miRNA可以進入到身體循環內的特性,使其可以應用於疾病監測、診斷甚至預防的生物指標。然而由於miRNA 僅由16-25個核苷酸所組成以及同一家族內有高度同源性(homology),因此準確定量miRNA是miRNA研究中不可忽視的一個門檻。
針對miRNA偵測中需要靈敏度、專一性以及快速的需求MiREXS推出MiRXES ID3EAL miRNA solution包含了一系列的RT-以及qPCR 分析試劑、cDNA 合成套組、qPCR master mix以及spike-in套組,皆是專門設計給miRNA定量用也都能與市售qPCR機相容。
此外更有文獻證明(Mestdagh et al., 2014),miRNA的含量十分的稀少,在一般市售的kit僅在200 uL血樣中發現約150種miRNA,而同一樣品及條件(200 uL 血樣)MiRXES ID3EAL miRNA solution卻能偵測到多於450種miRNA,能找到新的300多種miRNA,大幅度增加能探究的可能性。

MiRXES ID3EAL miRNA solution中最獨特的3大特點給你5項好處。
特點1.獨特的RT引子,利用成熟miRNA才有的特殊構型獨特的RT引子才能與其Hybridize,偵測真正有意義的miRNA。
特點2.專一性強的Real-Time PCR引子,能夠有效的達到PCR作用。
特點3.優化RT-qPCR試劑,大幅度減少雜訊的產生。

 
五大好處!

好處1.超高靈敏度,優化且獨特的試劑、引子,能夠偵測到最低1pg的miRNA。
好處2.良好專一性,不使用廣效型引子,專一引子能跟區別即使僅有1個核苷酸差異的序列。
好處3.快速偵測,整體上樣偵測時間僅需2小時即可完成。
好處4.可信數據,透過大數據且專利演算法設計,且試劑均經過實驗驗證。
好處5.提高方便性,套組最大化縮短前置作業需求,且各大qPCR機皆相容。

2021/04/08 Applikon BioSep 聲波分離系統,讓你不必在產量和品質間左右為難~

流感病毒致病性強且傳播和變異迅速,是全球公認最嚴重的公共危害之一,不斷研發新型、高效的疫苗便是預防和控制當前要務。為了因應大量且快速的疫苗生產,灌流系統(Perfusion)透過開放式系統,搭載細胞截留裝置,提高並維持槽體內細胞密度,持續生產與放大目標產物。   根據研究顯示,在T-Flask通過新鮮的培養液置換(MR,Medium Replacement)能夠有效提高H1N1Gag virus-like particles、Hemagglutinin(HA)與Neuraminidase(NA)的濃度,進一步放大產程至生物反應器與BioSep聲波細胞分離系統,相對於Batch culture Gag-VLPs增加60倍、HA濃度增加17倍、NA濃度更增加70倍,整體產量大幅提升,並且維持槽體內細胞高存活率和生長狀態,可延長製程達10周以上。  
不同於傳統以濾膜大小孔徑來進行培養液與細胞物理性分離方法,BioSep專為灌流系統所設計,採用定頻聲波分離技術,可分離不同粒子大小的物質,經由控制器產生聲場後在Chamber內形成駐波並形成高低壓帶,當細胞懸浮液通過時受到牽而引偏離中心高壓帶,而分布並截留至波峰與波谷的低壓區域,有效將Viable cell與細胞殘體分離高達95%以上,能有效的去除可能造成細胞毒性或對產物負面影響的代謝物,提升產物的品質和穩定性。   BioSep系統無槽體品牌的限制,可直接組裝於槽體上方,透過簡單的參數設定即可輕鬆放大產物,系統廣泛應用於各種Cell line與微生物抗體蛋白的產物收集,免除傳統方法的阻塞和耗材維護問題,同時幫實驗室解決空間、時間兩大煩惱,絕對是最高CP值的經濟選擇!心動不如馬上行動!現在就手刀報名Demo體驗吧! 詳細產品說明請點我   參考文獻: Alina Venereo-Sanchez, Melanie Simoneau, Stéphane Lanthier, Parminder Chahal, Lucie Bourget, Sven Ansorge, Rénald Gilbert, Olivier Henry, Amine Kamen.

2021/04/26 關於血清的那些事兒(一):血清中的沉澱







血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體,是血漿去除纖維蛋白後的混合物,主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類、維生素和多肽(如生長因子、胰島素、促生長激素)等。血清是細胞培養過程中重要的營養物質,同時也對細胞起到一定的保護作用。


纖維蛋白
纖維蛋白肉眼可見的較大物質(可達1-2 mm)。血清是在低溫條件下收集並迅速加工處理,導致一些纖維蛋白原(纖維蛋白的前身)仍存在於溶液中。雖然過濾去除了絕大部分的纖維蛋白,但解凍過程中,纖維蛋白原會再次轉化成纖維蛋白析出,形成沉澱。

磷酸鈣
磷酸鈣一種常見的沉澱物,表現為雲狀。通過倒置顯微鏡觀察,會發現許多小黑點。由於布朗運動,這些黑點可自由移動,因此常備誤認為是微生物污染。
 
少量的沉澱是血清解凍過程中的正常現象,過於澄清的血清並不代表更高的品質,也可能是「預老化」(加工過程中反復凍融盡可能的去除纖維蛋白原)的結果。雖然血清中的沉澱很難預測和阻止,但合理正確的儲存和使用方法可以降低血清中沉澱的析出,同時也可採取簡單的方式去除沉澱物。




  • 血清熱滅活;

  • 37 ℃水浴保溫;

  • 頻繁的解凍與凍存操作;

  • 解凍過程中未混合;

  • 經 γ-輻射;

  • 2-8 ℃ 長時間儲存;

  • 在自動解凍的冰箱中儲存。



如果血清中含有大量的沉澱,我們不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉澱物,可將血清分裝至無菌離心管中,以 400 g 稍微離心,上清液直接加入培養基內一起過濾。



  1. 將凍存的血清移到 2-8 ℃ 的冰箱中,過夜處理;

  2. 將血清移至 37 ℃ 水浴中,間歇性搖晃混勻底部的溶解物,直至全部溶解。


① 溫和的升溫過程可有效減少沉澱的產生,不推薦直接高溫解凍血清;
② 解凍之後的血清不要長時間放置在 37 ℃ 下;
③ 若血清沒有混勻且放置於高於 40 ℃ 的水浴中,底部的蛋白會變性形成沉澱;
④ 在解凍過程中,需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉澱;
⑤ 在解凍或長時間儲存之後,血清中會出現渾濁物和絮狀物;
⑥ 反復凍融會造成血清的沉澱增多,給後續處理帶來麻煩,我們建議血清的解凍/凍存次數越少越好。



血清應當儲存在-10 ℃ 或更低溫度條件下
儲存在-80℃ 下的血清,雖然在性能方面也沒有任何變化,但我們建議不要在該條件下儲存,一方面 -80℃ 會增大血清包裝瓶破裂的風險,另一方面解凍時巨大的溫度變化會導致產生更多的沉澱。
血清一旦解凍,可在2-8 ℃條件下儲存 6 週。如果解凍之後的血清儲存時間需要大於 6 週,建議分裝成合適的體積並重新凍存。

2021/04/28 用於 HEK 293 細胞培養的 HyClone培養基

  HEK 293 轉化細胞廣泛用於病毒和蛋白質生產、細胞週期、基因表達、代謝作用、受體結合研究以及其他研究。HEK 293 細胞可以貼壁培養或懸浮培養。該上皮細胞系來源於原代人胚腎細胞,此類細胞由經剪切的 5 型腺病毒 DNA 轉化而成。轉化使細胞能夠通過大量傳代進行連續傳代培養,並引入有助於腺病毒生產的其他有利特性。

  • HEK 293 細胞的應用


  利用經剪切的 5 型腺病毒 DNA 進行的轉化過程使 HEK 293 細胞系對人腺病毒非常敏感,且接受腺病毒 DNA。傳統上難以培養和測定的腺病毒更易於使用 HEK 293 細胞進行培養。這種高度易感性可能是由於 HEK 293 細胞能夠表達出一種或多種 5 型腺病毒特異性產物,從而使其具有重要用途 。隨著病毒成為研究和基因工程的流行工具,HEK 293 細胞系也已在研究人員中普遍使用。某些基因治療應用利用重組病毒的感染能力。將這些病毒用作治療基因的載體,感染治療基因並將其整合到宿主細胞基因組中。這些病毒必須使用易感細胞系進行培養。圖 1 中出示了用攜帶綠色螢光蛋白 (GFP) 基因的重組腺病毒轉染後的 HEK 293 細胞。如圖所示,該標記基因在宿主細胞內得到表達,並且可通過螢光顯微鏡觀察。除使用病毒載體外,將核酸整合到宿主細胞內的其他方法包括電穿孔法、脂質體轉移法、磷酸鹽沉澱法和顯微注射法。這些方法中的大多數均與 HEK 293 細胞一併用於穩定或暫時性的基因表達。

 
圖 1. 在 QBI-AdenoGFP 轉染後,懸浮培養 HEK 293 細胞。

  • 在HyClone培養基中培養 HEK 293 細胞


  儘管 HEK 293 細胞是自然貼壁細胞(圖2),但其可適應懸浮培養。HEK 293 細胞通常在方瓶、搖瓶、攪拌瓶反應器和生物反應器中以懸浮和微載體培養方式進行培養。因為這些細胞用途廣泛,所以 HEK 293 培養基開發人員宜考慮針對各種應用(如病毒和蛋白質生產或細胞轉導)優化培養基。圖3 中示出了在 HyClone 培養基以及在兩種含蛋白質的培養基中培養的 HEK 293細胞生長曲線。圖4 中示出了簡單的分批補料培養可通過使用 HyClone 來實現高細胞密度。


圖 2. HEK 293 細胞貼壁培養

圖3.使用 HyClone 培養基和含蛋白培養基在 125mL 錐形瓶中懸浮培養 HEK 293 細胞獲得的代表性生長曲線。


圖4. 生長曲線示出了補料在標準分批和重複分批懸浮培養中使用無蛋白 HyClone 培養基和含蛋白培養基獲得的 HEK293 細胞密度的影響。通過每 24 小時更換所有培養基進行重複分批培養。

  • HyClone CDM4 HEK 293與SFM4Transfx-293介紹


1. CDM4 HEK 293培養基
  HyClone CDM4 HEK 293 是一種化學成分限定的培養基,一種無蛋白和無動物源成分,可用於培養 HEK 293 細胞,支援懸浮細胞培養狀態下的高產率和細胞密度,進行病毒載體和重組蛋白生產。可提供液體或乾粉形式,對特定要求的工藝 CDM4 HEK 293 可提供定制配方和補料系統。

主要特點包括:
無動物原成分配方
化學成分限定
支援細胞高密度培養、重組蛋白高表達量
和病毒載體高產量
支援直接馴化和間接馴化
按照 cGMP 要求採用藥典級別原料進行生產
  2. SFM4Transfx-293 轉染培養基
  HyClone SFM4Transfx-293 是一種無血清和無動物源成分的培養基,支持多種 HEK 293 細胞的懸浮培養,同時可促進 HEK 293 細胞的轉染,支援不同的轉染方式如脂質體、聚合物和電轉,獲得更高的轉染效率,高細胞密度和高蛋白產率,可用於慢病毒、AAV 等的暫時性轉染和病毒生產。可提供液體和乾粉形式,對特定要求的工藝 SFM4Transfx-293 可提供定制配方和補料系統。

主要特點包括:
無動物源成分配方
支援不同的轉染方式,獲得高轉染效率
可用於慢病毒、AAV 等的暫態轉染和病毒生產
支援細胞高密度培養、重組蛋白高表達量
和病毒載體高產量
按照 cGMP 要求採用藥典級別原料進行生產