使用VIPS與InstiGRO補充劑改善HEK293細胞株系列之克隆生長
介紹
基因和細胞治療工作流程經常利用 HEK293/293T 細胞生產病毒載體。正如2020年 FDA 關於細胞和基因治療的 CMC 和 IND 指南中所述，監管機構和製造商都在尋求標準化病毒載體生產工作流程的最佳實踐。出於對患者安全的敏銳關注，指南中強調避免使用動物源性試劑 (Animal-derived reagents)，並使用克隆性保證 (Assurance of Clonality) 作為生產質量控制的一部分。
本篇評估了使用經過驗證的原位孔盤接種 (Verified In-situ Plate Seeding, VIPS™) 儀器，一種提供監管保證的基於圖像原理之高效單細胞接種儀，以及一種支持早期單細胞生長的無動物性成分之細胞生長補充劑 InstiGRO™ HEK，對於四種不同 HEK 細胞株：293T (ECACC)、HEK293 (ECACC)、Exp293F™ (Thermo Fisher) 和 HEK293 6E (由 GSK 提供) 進行單細胞接種 (Single cell seeding) 的後續克隆生長影響。
VIPS™ automated single cell seeder，具有基於圖像的監管證據
結果
表1. 使用 VIPS™ 和不同條件的平均播種效率
第一個關鍵點是播種效率 (Seeding efficiency)。與預期播種效率為30%，使用0.5個細胞/孔濃度的手動限制性稀釋 (Limiting dilution, LD) 相比，VIPS™記錄的播種效率在62%和83%之間，是 LD 的2-3倍。在實踐層面上，使用 VIPS™ 提升播種效率將可顯著減少相同實驗目標下所需消耗的細胞孔盤數。
第二個關鍵點是使用 InstiGRO™ HEK 補充劑可顯著改善單個 HEK293 細胞的存活和生長。使用 Solentim Cell Metric®全孔成像儀監測後續克隆生長，圖2顯示了在使用 VIPS™ 接種並添加 InstiGRO™ HEK 後 293T 細胞生長增加的圖像，而圖3顯示了所有細胞類型在添加 InstiGRO™ HEK 後的克隆生長百分比增加。
圖2. 使用(右)和不使用(左) InstiGRO™ HEK 細胞培養補充劑的克隆生長圖像。InstiGRO™ HEK 在所有測試條件下對克隆生長都有顯著的正向影響，生長增加了2.7到11.5倍
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