如果不做動物測試那要如何得知化妝品對人類皮膚沒有過敏性及傷害性呢？目前有兩種方式，第一種是利用人造皮膚進行測試，人造皮膚可以模仿實際人體皮膚對產品及其含有的化學物質的反應，亦可模仿不同的皮膚類型和年齡。例如，使用紫外線可以模擬較老的皮膚，又如增加黑色素細胞將皮膚顏色深一點，模擬出不同膚色，可用於比較不同種類的人的防曬效果。為了解決與人體其他部位潛在問題，有研究公司開發出一種人類肝臟合成模型，由於肝臟是身體主要排毒器官，該模型可測試肝臟是否能排除有害成分和化學物質。第二種則是送到專門的檢測中心，利用非常高靈敏度和特異性的體外篩選來測試潛在風險的確定結果。
 
       J-TEC為日本第一家以再生醫學製造產品的公司，同時也致力於開發組織工程醫療產品，J-TEC已應用表皮和上皮細胞培養技術來開發供研究使用的人體組織培養模型，即LabCyte EPI-MODEL（人類3維培養表皮細胞模型）和LabCyte CORNEA-MODEL（人類3維培養角膜上皮模型），可用於化妝品、藥物之皮膚刺激性等試驗，其模擬人類皮膚表皮結構，更貼近真實反應狀況，作為有效的動物試驗替代方法。12/16 Free Webinar開始報名，讓您更加了解人造皮膚試驗喔~
 
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細胞治療是近年興起的一種醫療方式，主要是透過將特定細胞施打進人體，以達到對抗癌癥、治療疾病、修復組織等目的。由於細胞治療產品的主成分是活細胞，對於人體的安全性便格外重要。不論是臨床試驗審查或產品查驗登記審查，對於細胞治療產品的原料、試劑，以及最終細胞產品本身都需要進行嚴格的安全性管控，包括無菌試驗、內毒素、黴漿菌、外來物質含量等檢測。
在上述各項安全性檢測中，黴漿菌檢測(Mycoplasma detection)對於細胞治療的研發階段及產程放大都相當重要，因為黴漿菌汙染是細胞實驗最常見的污染之一。而一旦發生汙染，不論是細胞相關製品或最終細胞產品都可能檢測出黴漿菌的存在。若黴漿菌進入人體則很可能會致病，因此不論是日常監測或是細胞終產品，都應該定期進行黴漿菌監測，以確保細胞治療產品不會因黴漿菌存在而對人體造成病害。
根據生物藥品檢驗基準規定，黴漿菌檢測的主要方法有三種，包含：培養基培養法(culture)、指示細胞培養法(Indicator, Hoechst DNA stain)及聚合酶鏈鎖反應測試法(PCR NTA-base)。其中，最快速有效的檢測方法就是PCR，除了省時、高效率，PCR還具有特異性高、靈敏度高、檢測成本低等等優點，因此PCR也是實驗室最常使用的黴漿菌檢測方法。再者，不論歐盟藥典或美國藥典都已將PCR檢測法納入規範，因此現在是可以透過PCR檢測方式證明細胞產品是否存在黴漿菌汙染的。然而，PCR會有偽陽性或偽陰性的問題產生，因此會需要搭配positive, negative及internal control一起進行。
為求樣品製備快速，許多實驗室在黴漿菌偵測時，會使用細胞培養後的培養基作為樣品。然而在黴漿菌檢測PCR的結果判讀上，最容易被忽略的問題就是PCR抑制作用(PCR inhibition)造成的偽陰性結果。PCR抑制是指樣品中因含有PCR 抑製劑(PCR inhibitior)，造成PCR擴增( amplification)被阻止並使 PCR 反應失敗的現象。PCR抑制劑包括化學物質或物理障礙，常見的 PCR 抑製劑包含蛋白質、鹽類、離子、介面活性劑，以及用於 PCR 反應的樣品本身(如細胞培養基內含有的FBS)、DNA 或緩衝溶液中的污染物等。此外，樣品製備、DNA萃取、DNA純化時使用的化學物質(如phenol/chloroform)，甚至實驗中使用到的塑膠、玻璃器皿都可能造成PCR抑制作用，種類繁多，不一而足。

PCR反應進行時，DNA polymerase需要輔因子提升其活性。當PCR抑制發生時，PCR抑制劑會干擾DNA polymerase與輔因子結合，進而降低酵素活性，造成DNA合成被抑制。例如Taq polymerase需要Mg²⁺提升活性，但reagent中若含有EDTA則會螯合Mg²⁺，使得Taq polymerase活性降低，進而造成PCR抑制作用。

要解決PCR抑制作用，需要設法降低或去除樣品中的PCR抑制劑。最常見的方法便是稀釋PCR樣品，透過降低樣品中PCR抑制劑的濃度與含量，來降低DNA聚合酶被干擾的可能性，使得PCR反應可以順利進行。然而此方法並不適用在黴漿菌偵測這種樣品中本身目標物含量就極低的PCR中，若是透過稀釋樣品試圖解決黴漿菌偵測的PCR抑制作用，反而可能會使樣品中即使存在黴漿菌，卻因為稀釋導致濃度過低、甚至低過PCR偵測靈敏度，因而人為造成偽陰性的結果發生。

另一個PCR抑制的解決方法則是將樣品做核酸萃取，透過萃取並純化出DNA的方式，去除樣品中其他可能的PCR抑制劑，並用高純度的DNA去進行PCR反應，以避免PCR抑制作用。核酸萃取也是EP2.6.7法規規範中黴漿菌偵測需進行的步驟，法規中建議使用DNA extraction kit，透過收取培養細胞並萃取出DNA，搭配positive, negative及internal control一起進行PCR，就可以偵測出細胞中含有的黴漿菌，並避免PCR抑制的偽陰性結果。因此，使用符合EP法規規範的Mycoplasma detection PCR方式，包含使用符合法規的PCR kit、DNA extraction kit及實驗步驟偵測黴漿菌，才是真正經過確效、能確保細胞治療產品不含黴漿菌汙染，又符合法規規範的方法。那麼這樣的kit哪裏有呢？
岑祥公司提供您CellSafe HiSense^TM Mycoplasma PCR Detection Kit (HDEP-100)，符合歐盟藥典EP2.6.7規範的黴漿菌偵測protocol，包含詳細的細胞樣品製備說明、核酸萃取步驟及黴漿菌偵測PCR步驟，Kit中使用高度保留性(highly conserved)的黴漿菌16S核醣體序列primer，可偵測多達209種的黴漿菌，PCR靈敏度達到1fg(10^-15g)DNA，並具備內部效能監控IAC (Internal Amplification Control)──提供positive, negative及internal control DNA，更附有原廠確效電泳圖及判讀說明，一組kit就能完成樣品偵測與結果確效，使黴漿菌偵測一次到位。CellSafe HiSense^TM Mycoplasma PCR Detection Kit，適合偵測細胞治療產品及樣品需要符合EP法規的您！
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